Obtención de las esporas de Bacillus subtillis
Se obtuvo la bacteria de Bacillus subtillis de un medio de agar nutritivo criterion del cual se tomara una colonia del cultivo para inocular en el medio de esporulación. Las esporas de Bacillus subtillis se obtuvieron por medio de cultivos de esporulación definido por J.Edward Donellan en donde se utilizan sales de calcio y magnesio para favorecer la esporulación de las bacterias se colocaron en tubos Falcon de 20 mL por 20 días ,después de este tiempo se lavaran las esporas mediante centrifugación a 8000 g, el sedimento se dejo en la base del tubo y se decanto para después colocar 20 mL de agua destilada. Este procedimiento se realizara tres veces para asegurar que solo queden esporas. Al igual se realizo sonicacion con agua fría, un minuto por cinco días. Posteriormente se revisaron en el microscopio óptico para garantizar su correcta esporulación y que no existiera ningún contaminante en el tubo con las esporas de Bacillus subtillis.
Obtención de la concentración optima de esporas
Se realizaron diluciones de la espora de Bacillus subtillis con agua destilada estéril desde 1:10 hasta 1:20 en tubos Falcon de 10 mL.Posteriormente se cultivaron 25 microlitros de cada dilución en una caja petri con 40 mL de agar nutritivo criterion y se dejaron por 24 horas a 37° C en la estufa . Después se realizo un conteo de colonias descartando las inviables . Los datos obtenidos se utilizaron para realizar los cálculos correspondientes para obtener una concentración de 1x 107 en 300 mL de agua destilada estéril.
Con la siguiente formula : C1V1=C2V2
simpleimente se raliza el despeje para la concentracion o volumen que se requiera
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