viernes, 18 de noviembre de 2011

presentacion sobre captacion de metales

Resumen
este tipo de trabajos donde se extraen las membranas de las bacterias sirve mucho en tratamiento de agua ya que se comprobo que son capaces de captar metales pesados  en especial el magnesio ademas  se pueden   recuperar y volver a utilizar

lo que falta

  •  Estandarizar el procedimiento de las isotermas
  • Realizar el daño con fenton por lo tnato estandarizar la concentracion de fenton que se va a utilizar
  • Estandarizar el prodedimeitno con crital violeta y volver a colocar con fenton
  • Observar si cambia la absorvancia de la espora conforme el daño por tiempo de exposiocion ala reaccion


despues de la tormenta de la isotermas un poco de ironia

bibliografia base


  • Anandmohan, Josph Dunn, Melvin C. Hunt . Charles E. Sizer.(2009). Inactivation of Bacillus atrophaeus Spores with Surface-Active Peracids and Characterization of Formed Free Radicals Using Electron Spin Resonance Spectroscopy.Journal of Food sciencie.pag.
  • C. Virginia (20089.Estudio de los mecanismos moleculares responsables de la adaptacion del desarrollo de los bacteriófagos. Facultad de ciencias de Madrid



  • Bandala E R, B. Corona-Vásquez, R. Guisar, Melesio Uscanga. (2007) Aplicación de procesos avanzados de oxidación en la desactivación secuencial de microorganismos resistentes en agua.Ciencia ahora.No.20 



  • F. Tovar-Rojo, R.-M. Cabrera-Martínez, B. Setlow1 and P. Setlow.(2003). Studies on the mechanism of the osmoresistance of spores of Bacillus subtilis. Journal of applied microbiology .



  • Satoshe kosuta. (1991).Permeability of dormant sporeso of Bacillus subtillis to malachite green and crytal violet. University Medical School, Mizuho-ku, Nagoya .Journal of  general microbiology. Vol. 137 pag.607-613



  • S.B. Young P. Setlow.(2004). Mechanisms of Bacillus subtilis spore resistance to and killingby aqueous ozone journal applied microbiology





  • Karl J Indest . I Wallace G. Buchholz , P. Setlow.(2009). Modeling the molecular mechanism of bacterial spore germination and elucidating reasons for germination heterogeneity.Journal of food  science .Vol. 74  pag. 74-77.



  • Aquino Huitle, L. M. 2007. Inactivation de esporas de Bacillus subtilis con dióxido de titanio inmovilizado. Tesis Licenciatura. Ingeniería Civil. Departamento de Ingeniería Civil y Ambiental, Escuela de Ingeniería y Ciencias, Universidad de las Américas Puebla. Mayo. Derechos Reservados © 2007.

sobre mi concetracionde esporas

bueno pues la modifique coloque un OD de absorvancia osea demasiadas esporas flata realizar los cultivos ara determianr concentracion de esporas pero ni aun con esta modificacion slaio la isoterma por eso cmabiare la cncetracion del colorante y la de esporas la dejare continua.

lo aprendido colorante

Bueno pues dentro de lo aprendido hasta ahora es que el verde de malaquita se disuelve muy facil en agua pero no entra en la ley de lambert beer ya que es un colorante etremedamente fuerte y tiene que serlo ara teñir a las esporas pero no ni en una concetracion de .085 milimolar entra dentro la ley asi que tendre que provar a una concentracion de .0040 milimolar para ver si a esa concentracion si se obtiene  una cienta de adsorcion lineal. 

Verde de malaquita

Como quimicos  sabemos que nada mejor uqe la hoja de seruridad para aprender de un compuesto asi que aqui les va el link verde de malaquita

ley de lambert- beer

para los que no entienden la ley de lambert beer  por facvor hagan clik en el enlace para entrar a una pagina donde se realiza un apractica de laboratorio muy parecidada alo que hice.

Metodologia parte 2 isotermas


Realizar isotermas de absorción de las esporas de Bacillus subtillis



El stock previamente establecido con una concentración de  1x107 de esporas de Bacillus subtillis se coloco un militro en una solución acuosa de verde malaquita con una concentración .34mM en 20 ml volumen final  en agitación constate  y a 30°C de temperatura  constante  cada 5 minutos se obtenía una muestra de un militro y se centrifugaba hasta obtener un pellet de esporas y se midieron las absorbancias de  cada muestra a 616.5 nanómetros , este procedimiento  se realizo tres veces para observar la estabilidad en los registros de las absorbancias(ver Tabla1)  y con esto se pudo ver que la concentración del colorante es muy elevada y no da un resultado de absorbancia lineal como seria lo mejor para aplicar a la ley de Lambert- Beer. Por esta razón se realizaron 9 dilución seriadas en matraces aforados de 50 ml. En las cuales se tomaron muestras homogéneas para tomar sus absorbancias (ver Tabla 3) y lograr hacer una grafica de calibración ( grafica1.)para obtener la concentración a la cual el colorante se comporta dentro de la ley de Lamber –Beer.



Resultados de avances



Tablas de isotermas de verde de malaquita que se encuentra fueras de la ley de Lambert- Beer.



Tiempo
Absorbancia registrada
0
0.137
5
0.399
10
0.325
15
0.552
20
0.12
25
0.615



Tabla 1. Absorbancias de cinética de adsorción del colorante verde de malaquita con esporas de Bacillus subtillis.



Tiempo
Absorbancias registrada 
0
3.58
5
4.1
10
3.58
15
3.9
20
3.8
25
3.7
30
4.03



 Tabla2. Control  verde de malaquita 0.34 mM sin esporas se logra verificar que esta concentración es muy elevada para la ley de Lambert-Beer.





Solución
Absorbancia registrada
1
2.8
2
2.8
3
2.8
4
2.3
5
1.17
6
0.621
7
0.251
8
0.135
9
0.044



Tabla3. Se muestra las absorbancias registradas de la diluciones realizadas para obtener la curva de calibración






Grafica1. Curva de calibración que se realizo con las diluciones con esto se obtiene la épsilon y lograr despejar a concentración de la siguiente ecuación  a=bcὲ


Metodologia primera parte junto con mis avances con las esporas


Obtención de las esporas de Bacillus subtillis



            Se obtuvo la bacteria de Bacillus subtillis de un medio de agar nutritivo criterion del cual se tomara una colonia del cultivo  para inocular en el medio de esporulación. Las esporas  de Bacillus subtillis se obtuvieron por medio de cultivos de esporulación definido por J.Edward Donellan en donde se utilizan sales de calcio y magnesio para favorecer la esporulación de las bacterias se colocaron  en tubos Falcon de 20 mL por 20 días ,después de este tiempo se lavaran las esporas mediante centrifugación a 8000 g, el sedimento se dejo en la base del tubo y se decanto para después colocar 20 mL de agua destilada. Este procedimiento se realizara tres veces para asegurar que solo queden esporas. Al igual se realizo sonicacion con agua fría, un minuto por cinco días. Posteriormente  se revisaron en el microscopio óptico para garantizar su correcta esporulación y  que no existiera ningún contaminante en el tubo  con las esporas de Bacillus subtillis.



Obtención de la concentración optima de esporas



 Se realizaron diluciones de la espora de Bacillus subtillis con agua destilada estéril desde 1:10 hasta 1:20  en tubos Falcon de 10 mL.Posteriormente se cultivaron 25 microlitros de cada dilución en una caja petri con 40 mL de agar nutritivo criterion  y se dejaron por 24 horas a 37° C en la estufa . Después se realizo un conteo de colonias descartando las inviables . Los datos obtenidos se utilizaron para realizar los cálculos correspondientes para obtener una concentración de 1x 107  en 300 mL de agua destilada estéril.

Con la siguiente formula : C1V1=C2V2
simpleimente se raliza el despeje para la concentracion o volumen que se requiera

Mis materiales esenciales de trabajo en laboratorio




Materiales

Reactivo
Pureza
Marca
Verde de malaquita
90%
Sigma-aldrich
Cristal violeta
90%
Sigma aldrich
Etanol
96%

Agar nutritivo

Criterion



Equipo
Marca
Estufa
Thermo heraeus modeloB6030
Biocentrifuga
Fresco Heraeus
Sonicador
Sonics vibra cell
Shaker banth
Lab line orbit
Vortex
Fisher genie 2
Espectrofotómetro
Hach
Espectrofotómetro
Carey
Centrifuga
Sorvall Biofuge primo
Microscopio óptico

Celdas de cuarzo 1cm

Matraces aforados de 50ml



Mi tesis mis objetivos


OBJETIVO GENERAL.



Determinar  el daño realizado a la espora Bacillus subtillis  por la reacción de Fenton mediante métodos espectrofotométricos.



OBJETIVOS ESPECIFICOS.

.

1)      Obtención de las esporas de  Bacillus subtillis.

2)      Obtener la concentración optima de esporas de Bacillus subtillis para realizar la reacción

3)      Realizar  la isoterma de absorción de espora de Bacillus subtillis.

4)      Determinar la absorbancia de la espora Bacillus subtillis con y sin colorantes.

5)      Cuantificar  el efecto de la reacción Fenton en la espora.

Mi tesis, mi justificacion para mi trbajo


En las ultimas décadas la demanda de agua ha incrementado de manera considerable por lo que es necesario la utilización de métodos de tratamientos de agua cada vez mas efectivos ya que como consecuencia del agua contaminada. Hoy en día  hay una gran cantidad de enfermedades gastrointestinales que afectan a los países subdesarrollados. En México una de las principales causas de muerte en niños menores de 5 años  es por la ingesta de agua contaminada con parásitos como Entamoeba histoliyca o baterías del genero Clostridium.



    La justificación para realizar esta investigación es que la espora es altamente resistente a los tratamientos de agua en los cuales se ha demostrado que los proceso avanzados de oxidación son muy efectivos en la degradación de agentes orgánicos y  microorganismos pero su costo es mas elevado que los métodos convencionales de desinfección de agua , por eso mediante este proyecto se pretende establecer los posibles pasos de inactivación para una posible optimización de la reacción Fenton.

links de interes

procesos avanzados de oxidacion


Procesos avanzados de oxidación (PAOs)





              Los métodos avanzados de oxidación se  encuentran incluidos dentro de los procesos de oxidación química mas efectivos para el tratamiento de agua (Bandala et al.  2007).

En el proceso la carga contaminante se trata con una combinación de peróxido de hidrogeno y sulfato ferroso comúnmente llamado reactivo Fenton en que típicamente se utiliza una temperatura entre 20 °C y 40°C .El proceso puede alcanzar una significativa degradación de los contaminantes orgánicos si se agrega el reactivo Fenton en condiciones acidas y con la temperatura apropiada, comprendiendo  un cambio estructural de los compuestos orgánicos que logra un eventual tratamiento biológico posterior. Una oxidación total de los compuestos orgánicos en sustancias inocuas que hacen  posible una descarga segura en el efluente sin necesidad de un posterior tratamiento.

 Bibliografia
  • Bandala E R, B. Corona-Vásquez, R. Guisar, Melesio Uscanga. (2007) Aplicación de procesos avanzados de oxidación en la desactivación secuencial de microorganismos resistentes en agua.Ciencia ahora.No.20 

sábado, 5 de noviembre de 2011

A continuacion preseto el abstract de un muy bue articulo de Peter Setlow  una persona que ha estudiado por largo tiempo a las esporas de Bacillus Subtillis


Abstract
Log phase Bacillus subtilis cells lacking the
mscL
large conductance are sensitive to an osmotic downshock
gene encoding the mechanosensitive (MS) channel of
¸
downshock resistance in late log and early stationary phase
growth that is partially dependent on three likely MS channel
proteins of small conductance (MscS), YfkC, YhdY,
and YkuT.
green
the MscL-, YfkC-, and YkuT-GFP fusions were functional
and overexpression of YkuT-GFP, or YkuT alone abolished
log phase
Western blot analysis found high levels of MscL-GFP in
early exponential phase cells with levels subsequently
decreasing greatly. MscS-GFP proteins were present in
exponential phase cells, but again disappeared almost completely
in stationary phase cells and these proteins were not
detected in spores. Western blot analyses further showed
that MS-GFP proteins were associated with the plasma
membrane, as expected. Fluorescence microscopy con-
0.5 M. However, B. subtilis mscL cells develop osmoticBacillus subtilis MS proteins were fused withXuorescent protein (GFP) at their C termini; at leastmscL cells’ osmotic downshock sensitivity.
W
plasma membrane, with non-uniform distribution of these
proteins along this membrane consistent with but by no
rmed the localization of MscL-GFP and YhdY-GFP to the

miércoles, 2 de noviembre de 2011

ESPORAS EN EL MICROSCOPIO

Esporas de Bacillus subtillis  observadas en microscopio electronico realizado en la Universidad de las Americas Puebla por Alba Bueno H.

lunes, 31 de octubre de 2011

link sobre esporas

un articulo que se recomienda

http://jb.asm.org/cgi/reprint/79/1/1.pdf 

Esporas





    El porceso de esporulacion es un proceso termoestable que se lleva acabo gracias a la expresion de diversos genes cuando se detecta un medio hostil para continuar su creecimiento, esta estructura llamada espora es muy resitenten a diferentes metodos de esterilizacion

domingo, 23 de octubre de 2011

esporas

La esporulaion es una manera por al cual las bacterias logran sobrevivir mucho tiempo a condiciones hostiles, este mecanismo se lleva acabo por genes que se activan en la bacteria dando como resultado la  resitencia; a calor seco y humedo exposion a UV hasta por 12 horas.

 imagen obtenido de :http://www.google.com.mx/imgresimgurl=http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/images/09espo2.gif&imgrefurl=http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/09esporas.htm&h=432&w=574&sz=30&tbnid=b49Okb22rD0xlM:&tbnh=90&tbnw=120&prev=/search%3Fq%3Desporulacion%26tbm%3Disch%26tbo%

martes, 18 de octubre de 2011

Genero Bacillus

Grupo de bacterias Gram positivas son aerobios estrictos o facultativos , son ubicuos por lo que se recuperan con facilidad, en la actualidad Bacillus subtillis es el mas utilizado y estudiado por lo que se utiliza en diversos estudios y como modelo en procesos de biotecnologia y en el caso a investigar en tratamiento de aguas residuales.

domingo, 16 de octubre de 2011

bacterias

Las bacterias son organismos unicelulares que no tienen nucleo pero que realizan distintos metabolismos de diferentes sustancias , estas pueden producir enfermedades a los humaos y animales o pueden ser beneficas para estos como para el ambiente.

Las bacterias se clasifican en gram positivas o gram negativas de acuerdo a la tincionde Gram que depende de la cantidad de peptidoglicano ( parte de la pared celular de la bacteria) para que atrape al colorante y este quede adentro. Estas tambien pueden ser clasificadas por su estructura que se divide en 3 bacilos cocos y espirilos o espiroquetas.

Imagen1. obtenida de:http://cursa.ihmc.us/rid=1GPL8YVR1-17TP121-FXV/Biolog%C3%ADa.cmap